本发明涉及一种测定超微滤膜孔径及孔径分布的方法，包括：1)选取基准物；2)扫描每种粒径纳米颗粒在紫外可见波长范围内的最大吸收波长，并在最大吸收波长下相应作标准曲线；3)选取单一粒径聚苯乙烯纳米颗粒配成质量浓度为C0的溶液，用超声使该粒径纳米颗粒均匀分散在水中，采用悬浮液过滤法对超微滤膜进行过滤实验，选取过滤后的溶液，测得该粒径聚苯乙烯纳米颗粒在最大吸收波长下的吸光度，并采标准曲线计算出过滤后溶液中该粒径纳米颗粒的浓度Ct，进而计算超微滤膜对该粒径聚苯乙烯纳米颗粒的截留率R；4)选用不同粒径的聚苯乙烯纳米颗粒重复步骤3)进行截留，根据测得的截留率计算该超微滤膜的膜孔直径。本发明原理简单，操作方便，能够较准确测定超微滤膜孔径及孔径分布。