本发明一种基于FITC的细胞微环境pH测定方法及其在破骨细胞封闭区中的应用。本发明通过将FITC通过化学修饰或物理吸附方式结合于待测表面，并设立标准pH对照，可通过荧光强度比率测定待测表面pH，该方法可用于测定细胞微环境pH，从而对细胞微环境特征进行定量分析。采用FITC作为荧光探针，获取简单，成本低；且本发明可对特定细胞微环境pH进行测定，实现对细胞微环境的定量分析。